總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒說明書 |
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總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）試劑盒說明書 微量法 注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。 研究意義： 測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫(yī)學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。 測定原理： 在酸性環(huán)境下，還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。 自備實驗用品： 恒溫水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 試劑組成和配制： 提取液：液體 100mL×1 瓶，使用前預冷。 試劑一：液體 15mL×1 瓶，避光保存。 試劑二：液體 1.5mL×1 瓶，4℃避光保存。 試劑三：液體 1.5mL×1 瓶，避光保存。 混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合，使用前37℃預溫。 樣品的制備： (1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品 血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超30d）后再測定。 (2) 組織樣品 按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。 (3) 細胞樣品 按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。 操作步驟： 1、分光光度計/酶標儀預熱30min，調(diào)節(jié)波長至593nm，蒸餾水調(diào)零。
2、操作表
注意：空白管只需測定一次。 總抗氧化能力計算公式： a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下 標準曲線：y=0.6308x+0.1291，R2=0.9989 （1）按樣本質(zhì)量計算 總抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷ 0.6308×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) =53.9×（△A-0.1291）÷W （2）按樣本蛋白濃度計算 總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反總÷(V 樣×Cpr) =53.9×（△A-0.1291）÷Cpr （3）按細胞計算 總抗氧化能力（U/104cell）=（△A-0.1291）÷0.6308×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數(shù)量（萬個）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 細胞數(shù)量（萬個） （4）按液體體積計算 總抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反總÷V 樣= 53.9×（△A-0.1291） V 樣總：加入提取液體積，1 mL； V 反總：反應總體積，204μL；V 樣：反應中樣品體積， 6μL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL b.用 96 孔板測定的計算公式如下 標準曲線：y=0.3154x+0.1291；R2=0.9989 （1）按樣本質(zhì)量計算 總抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) =107.8×（△A-0.1291）÷W （2）按樣本蛋白濃度計算 總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷(V 樣×Cpr) =107.8×（△A-0.1291）÷Cpr (3) 按細胞計算 總抗氧化能力（U/104cell）=（△A-0.1291）÷0.3154×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數(shù)量（萬個）= 107.8×（△A-0.1291）÷ 細胞數(shù)量（萬個） （4）按液體體積計算 總抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷V 樣= 107.8×（△A-0.1291） V 樣總：加入提取液體積，1 mL； V 反總：反應總體積，204μL；V 樣：反應中樣品體積， 6μL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL |
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